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Major Member
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引用:
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作者nzcym
HSP 是個普遍存在於生物界的蛋白質, 分離與確認不外是 RPLC, SDS-PAGE, LC-MS, ELISA. 只是 RPLC, SDS-PAGE, natural PAGE 都是根據分子量帶電量分離而已; ELISA 是針對分子形狀辨認, 準確度更高. 溶血的時候, 該出來的都會出來. 要是幸運沒熱到溶血, 那麼由肝臟取樣做 slide, 上 ABC stain 就派上用場. 至於直上 mono clony AB, 您要是有把握, 不介意多花時間當然好啊!
請您記得一句話: [成功的人找方法, 失敗的人找理由.] 自製 poly/mono colony AB 不過是做研究的基本功而已. ABC stain 是拿來增強AB response 用的. 至於如何拿來診斷? 唉, 那也要等 AB 分離純化出來才行啊. 即使您口口聲聲宣稱狗的屍體被火化無法解剖驗屍, 無法解釋其他狗的存活. 鄙人還是能寫出科學檢驗的方法, 只看您有沒有這能力去思考可能的解法與執行而已.
想不出解決問題的方法不要緊, 能力不足無法執行也不要緊; 但是認...
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碰上小弟只能說大師遇人不淑誤交匪類，當年小弟不是光等檢驗員送報告上來祇看切片而已，而是事必躬親樣樣自己來，常規性病理/微生物檢驗就算檢驗員休假小弟一樣能代勞，小弟對有機/生化檢驗是略知皮毛爾已，但是臨床病理/微生物檢驗大師您最好有把握再來
引用:
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作者nzcym
HSP 是個普遍存在於生物界的蛋白質, 分離與確認不外是 RPLC, SDS-PAGE, LC-MS, ELISA. 只是 RPLC, SDS-PAGE, natural PAGE 都是根據分子量帶電量分離而已; ELISA 是針對分子形狀辨認, 準確度更高. 溶血的時候, 該出來的都會出來. 要是幸運沒熱到溶血, 那麼由肝臟取樣做 slide, 上 ABC stain 就派上用場. 至於直上 mono clony AB, 您要是有把握, 不介意多花時間當然好啊!...
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大師您提供的連接是從酵母菌裡分析熱休克蛋白，首先過程還是要打碎細胞，而不是直接從培養液裡做電泳，可以請大師證明熱休克蛋白是如何分泌進血漿中的嗎
溶血是紅血球破裂，狗的紅血球沒有細胞核，而大大PO上來的都是有核細胞產生熱休克蛋白，可否請大師PO對文章，或是證明狗的紅血球也能產生熱休克蛋白
引用:
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作者nzcym
直上 mono clony AB, 您要是有把握, 不介意多花時間當然好啊!
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奉勸大師沒做過的不要信口開河，這種少量的蛋白質抽取是先做SDS-PAGE，確定分子量後再從目標區膠塊中溶出需要的蛋白質，接著等蛋白質夠了再打進小白鼠做融合瘤，各種熱休克蛋白分子量差異那麼大，還能把單株抗體搞成多株抗體，難不成整條膠塊直接丟下去胡搞瞎搞
引用:
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作者nzcym
ELISA 是針對分子形狀辨認, 準確度更高
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大師可以介紹用ELISA分析辨識熱休克蛋白的論文嗎，大師的well底部COATING哪些東西，還請明示
引用:
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作者nzcym
由肝臟取樣做 slide, 上 ABC stain 就派上用場
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各種生物的熱休克蛋白分子結構分子量都不同，光一個熱休克蛋白就包含許多種不同分子量，大師您要染ABC stain 前已經確定有抗狗熱休克蛋白的抗體了嗎，是抗哪個分子量的
小弟不只幹過病理科開過刑事用診斷報告，也站過手術台當主刀醫師，醫學診斷不能想當然爾，更不能信口開河，必須有憑有據 |